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學術動態(tài)

固相法合成丙型肝炎疫苗多肽工藝研究

孫立樞

西北大學

摘要：本文以工業(yè)化生產為目的，研究了用Fmoc固相法人工合成丙型肝炎疫苗多肽(以下簡稱疫苗多肽)的生產工藝，比較了Wang樹脂和二氯三苯甲基樹脂(以下簡稱二氯樹脂)在固相合成中的的優(yōu)勢和劣勢，以及粗產物肽和目標肽的產率和純度；創(chuàng)造性的引入Nα-Dmb基團，提高了困難氨基酸Val的連接率；優(yōu)化了脫保護的策略以及切割試劑的選擇；通過質譜鑒定分析所得目標多肽的分子量，用RP-HPLC進行粗肽的分析和純化，系統(tǒng)完整的建立了整套合成純化工藝路線及相關的工藝參數，為后續(xù)的工業(yè)化生產奠定了堅實的基礎。采用該合成純化工藝路線，以二氯樹脂為載體，合成的粗肽產率達到了90.76％，純化后的目標肽產率為63.02％純度達到了98.5％，并實現了18克每批的合成量。二氯樹脂以其高效率、低成本、產品的高純度完全符合工業(yè)化生產疫苗多肽的各項經濟技術指標。論文包括以下四個部分： 1文獻綜述部分，簡述了丙型肝炎疫苗的研究現狀，詳細介紹了多肽固相合成技術中的合成方法、分離純化與鑒定技術，最后概述了多肽類藥物的應用情況與研究展望。 2采用Fmoc固相法人工合成了疫苗多肽，比較了兩種樹脂在合成過程中的異同點，對合成過程中的幾個重要步驟和難點進行了優(yōu)化和改進，如針對困難氨基酸Val的連接，設計了引入Nα-Dmb基團的獨特合成策略，提高了連接率及切割效率，確定了合成工藝中相關的各項工藝技術參數。最后用二氯樹脂做為載體進行了18克每批的疫苗多肽合成。 3用RP-HPLC進行粗肽的分析和純化，根據疫苗多肽的理化性質采用乙腈—水的流動相體系，并確定了RP-HPLC分析和純化的條件。 4總結了實驗結果，確定了疫苗多肽合成、純化工藝路線及相關的工藝技術參數。
關鍵詞： 固相法;丙型肝炎疫苗多肽;多肽純化;
專輯： 醫(yī)藥衛(wèi)生科技
專題： 基礎醫(yī)學
分類號： R392
導師： 陳五嶺;
學科專業(yè)： 微生物學
碩士電子期刊出版信息： 年期：2007年第04期網絡出版時間：2007-03-16——2007-04-15

固相法合成丙型肝炎疫苗多肽工藝研究|孫立樞|西北大學
固相法|丙型肝炎疫苗多肽|多肽純化

文章目錄
摘要
Abstract
第一章文獻綜述
1.1 丙型肝炎簡介
1.1.1 丙型肝炎病毒基因的多樣性
1.1.2 治療方法
1.1.3 HCV疫苗
1.1.4 DNA疫苗
1.1.5 HCV疫苗研究的挑戰(zhàn)
1.2 多肽合成技術
1.2.1 固相法多肽合成
1.2.2 固相法中的接肽反應方法
1.2.3 氨基酸保護基
1.2.4 載體樹脂
1.2.5 脫去保護基和樹脂
1.2.6 固相多肽合成中連接效率的檢測方法
1.2.7 多肽固相合成法中存在的問題及解決策略
1.2.8 固相多肽合成中新技術的應用
1.3 合成多肽的分離與分析
1.3.2 分析方法
1.4 多肽藥物
1.4.1 多肽藥物的藥代動力學與其檢測方法
1.4.2 多肽藥物的研究開發(fā)
第二章疫苗多肽的固相合成
2.1 儀器和設備
2.1.1 試劑
2.1.2 多肽合成實驗裝置圖
2.2 使用載體Wang樹脂合成疫苗多肽
2.2.1 Wang樹脂簡介
2.2.2 樹脂的活化
2.2.3 第一個氨基酸殘基的連接
2.2.4 樹脂上殘余反應基團的封閉
2.2.5 剩余氨基酸殘基的連接
2.2.6 脫保護方法
2.2.7 檢測方法
2.2.8 樹脂的切割
2.2.9 合成粗肽的MALDI-TOF MS鑒定
2.3 使用載體二氯樹脂合成疫苗多肽
2.3.1 二氯樹脂簡介
2.3.2 其他合成環(huán)節(jié)
2.4 結果與討論
2.4.1 保護基的選擇
2.4.2 載體樹脂的選擇
2.4.3 第一步的連接效率
2.4.4 第一步連接過程的不同
2.4.5 困難氨基酸Val的連接
2.4.6 未反應氨基酸的封閉
2.4.7 脫保護策略
2.4.8 切割試劑的選擇
2.4.9 粗肽的質譜鑒定
2.4.10 合成結果
2.4.11 擴大規(guī)模的疫苗多肽合成
2.5 小節(jié)
第三章疫苗多肽的分析與純化制備
3.1 前言
3.2 實驗部分
3.2.1 儀器設備
3.2.2 試劑及藥品
3.2.3 粗肽的分析
3.2.4 粗肽的純化
3.3 結果與討論
3.3.1 粗肽分析圖
3.3.2 雜質的產生
3.3.3 粗肽純化圖
3.3.4 目標肽的純度與產率
3.4 小節(jié)
第四章結論與展望
4.1 結論
4.2 展望
參考文獻
中英文詞匯對照表
致謝

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