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學(xué)術(shù)動態(tài)



 基于酰胺化的化學(xué)標(biāo)記技術(shù)在磷酸化多肽分析中的應(yīng)用


    鄒倫妃 張啟偉 肖琛 熊淼 鄭琦
江漢大學(xué)光電化學(xué)材料與器件教育部重點(diǎn)實驗室


摘要:蛋白質(zhì)的翻譯后修飾復(fù)雜多樣,通過激酶與磷酸酶調(diào)控的磷酸化是最廣泛、最重要的翻譯后修飾之一。定量分析磷酸化蛋白質(zhì)的動態(tài)變化,有利于闡明磷酸化修飾調(diào)控生命活動的機(jī)理,了解其在實現(xiàn)生物功能過程中的作用。以質(zhì)譜為核心的分析方法是當(dāng)前蛋白質(zhì)翻譯后修飾研究中最常用的定量技術(shù),主要包括無標(biāo)記定量、內(nèi)標(biāo)絕對定量、化學(xué)標(biāo)記等。本文將一種用于蛋白質(zhì)糖基化分析的標(biāo)記方法應(yīng)用于磷酸化多肽的研究。使用二甲胺標(biāo)記蛋白質(zhì)的所有酶解肽段,被酰胺化的羧基可提高TiO2對磷酸化多肽的富集特異性以及液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)檢測的靈敏度。穩(wěn)定同位素標(biāo)記實驗表明,該方法適用于高通量磷酸化多肽的相對定量分析?;诙装费苌幕瘜W(xué)標(biāo)記法在磷酸化多肽的質(zhì)譜分析中具有優(yōu)勢,有望成為生物組織中磷酸化蛋白質(zhì)研究的有力工具。


關(guān)鍵詞: 磷酸化;酰胺化;穩(wěn)定同位素標(biāo)記;液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS);
基金資助: 國家自然科學(xué)基金(21976069); 江漢大學(xué)科技創(chuàng)新專項(2021KJZX002);
專輯: 基礎(chǔ)科學(xué);工程科技Ⅰ輯
專題: 生物學(xué);化學(xué)
分類號: Q503;O657.63


鄒倫妃, 張啟偉, 肖琛, 熊淼, 鄭琦. 基于酰胺化的化學(xué)標(biāo)記技術(shù)在磷酸化多肽分析中的應(yīng)用[J]. 質(zhì)譜學(xué)報, 2022, 43(4): 463-472.

基于酰胺化的化學(xué)標(biāo)記技術(shù)在磷酸化多肽分析中的應(yīng)用

鄒倫妃, 張啟偉, 肖琛, 熊淼, 鄭琦.

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文章目錄
1 實驗部分
    1.1 主要儀器與裝置
    1.2 主要材料與試劑
    1.3 實驗條件
        1.3.1 色譜條件
        1.3.2 質(zhì)譜條件
    1.4 實驗方法
        1.4.1 羧基的酰胺化
        1.4.2 磷酸化多肽的富集
        1.4.3 穩(wěn)定同位素標(biāo)記
        1.4.4 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果與討論
    2.1 衍生原理
    2.2 衍生化處理的影響
    2.3 穩(wěn)定同位素標(biāo)記
    2.4 相對定量范圍和準(zhǔn)確度
    2.5 自縮合反應(yīng)的影響

3 結(jié)論


鄒倫妃, 張啟偉, 肖琛, 熊淼, 鄭琦. 基于酰胺化的化學(xué)標(biāo)記技術(shù)在磷酸化多肽分析中的應(yīng)用[J]. 質(zhì)譜學(xué)報, 2022, 43(4): 463-472.

基于酰胺化的化學(xué)標(biāo)記技術(shù)在磷酸化多肽分析中的應(yīng)用

鄒倫妃, 張啟偉, 肖琛, 熊淼, 鄭琦.

江漢大學(xué)光電化學(xué)材料與器件教育部重點(diǎn)實驗室


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