多肽的純度(HPLC)及多肽含量(Peptide Content)有何差別？

多肽的純度(HPLC)及多肽含量(Peptide Content)意義不同，訂購(gòu)多肽之前需要明確。

案例：1g 多肽  HPLC 99% 純度， 80% 多肽含量，水含量10%，TFA含量10%

稱(chēng)重：1g

多肽部分：800mg  【其中792mg 是目的多肽(多肽部分的 99%)，8mg 是其他肽雜質(zhì) (多肽部分的 1%)】

水部分：100mg

鹽部分： TFA 100mg

一般訂購(gòu)多肽純度指標(biāo)，指的是HPLC純度。

具體解釋?zhuān)?/span>

多肽的純度是指HPLC方法在220nm處檢測(cè)到的目標(biāo)多肽的含量(220nm是肽鏈的吸收波長(zhǎng))，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)不到水和殘留的鹽不?？砂l(fā)現(xiàn)其他的雜質(zhì)包括：缺失序列(缺失了一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的靶序列)，截?cái)嘈蛄?/span>(加帽過(guò)程中產(chǎn)生的序列)脫保護(hù)不完全序列(產(chǎn)生于整個(gè)合成過(guò)程或最后的裂解過(guò)程)。

多肽純化不涉及水和鹽。HPLC純化會(huì)產(chǎn)生少量的TFA(三氟乙酸)，如：游離的氨基末端和其他側(cè)鏈如Arg、Lys、His都可生成少量TFA雜質(zhì)。通常交付的多肽多含有微量TFA和殘留水。即使處于凍干狀態(tài)，水也會(huì)因共價(jià)結(jié)合的能力不同而不同程度地存在著。

純化前的多肽中包含的雜質(zhì)包括多肽和非多肽物質(zhì), 純化后的多肽中包含的雜質(zhì)除了TFA鹽，大多數(shù)為序列被修改的多肽。

     a.缺失了一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的靶序列

     b.為避免缺失序列的產(chǎn)生而進(jìn)行的加帽操作，截?cái)嘈蛄屑串a(chǎn)生于加帽過(guò)程中

     c. 產(chǎn)生于整個(gè)合成過(guò)程或最后的裂解過(guò)程

     d.保護(hù)基重新附著在多肽的其他位置  

如果對(duì)鹽有特殊要求，請(qǐng)?jiān)谠?xún)價(jià)時(shí)，明確一下(脫鹽，轉(zhuǎn)成醋酸鹽 等)。如果不注明，做成的多肽都是TFA(三氟乙酸)鹽形式。

注意，南京肽業(yè)生物科技有限公司使用的HPLC 測(cè)試體系如下：

Solvent  A: 0.1%Trifluoroacetic in 100% Acetonirile

Solvent  B: 0.1%Trifluoroacetic in 100% Water

Flow rate:1.0ml/min

Wavelength:220nm

色譜柱：C18 反相柱

如果您有特殊的分析條件(色譜條件)，請(qǐng)?jiān)谟嗁?gòu)之前告知，我們將和商討。如果您沒(méi)有特殊要求，我們的測(cè)試條件就是上述常用的體系。

多肽含量(Peptide Content)是指與非肽物質(zhì)(主要為抗衡離子和水)相比的多肽量?？赏ㄟ^(guò)氨基酸分析來(lái)確定肽凈含量。如果您需要這項(xiàng)服務(wù)請(qǐng)?jiān)谟唵紊厦鞔_。